Linfoma difuso de células B grandes

Morfológicamente se pueden reconocer tres variantes principales: la variante centroblástica, la inmunoblástica y la anaplásica. La mayoría de los casos de DLBCL son centroblásticos, que tiene la apariencia de linfocitos medianos y de gran tamaño con escaso citoplasma. Tienen además núcleos ovales o redondos que contienen cromatina fina, y se divisan entre dos y cuatro nucléolos dentro de cada núcleo. A veces el tumor puede ser monomórfico, compuesto casi en su totalidad de centroblastos. Sin embargo, la mayoría de los casos son polimórficos, con una mezcla de células centroblásticas e inmunoblásticas.[16] Los inmunoblastos tienen un citoplasma basófilo significativo y un nucléolo central. Un tumor puede ser clasificado como inmunoblástico si más del 90% de sus células son immunoblastos.[17] Esta distinción puede ser problemática, sin embargo, debido a que incluso entre los hematopatólogos no existe un consenso claro para la distinción de los centroblastos y los inmunoblastos, lo que disminuye la fiabilidad del diagnóstico.[18] La tercera variante morfológica, la anaplásica, está compuesta por células tumorales que aparecen de manera muy diferente de sus contrapartes normales de células B. Las células son generalmente muy grandes con un núcleo pleomórfico redondo, ovalado o poligonal, y pueden parecerse a células de Hodgkin o a las células de Reed-Sternberg.

Se ha intentado distinguir grupos heterogéneos de DLBCL mediante el uso de estudios de perfiles de expresión génica. Estos estudios examinan miles de genes simultáneamente utilizando un microarray de ADN, en busca de patrones que pueden ayudar a agrupapar los casos de DLBCL. Muchos estudios sugieren que los casos de DLBCL-NOS pueden ser separados en dos grupos sobre la base de sus perfiles de expresión génica; estos grupos se conocen como linfoma de células B semejantes a las del centro germinal (GCB) y linfoma de células semejantes a la célula B activada (ABC).[12][19][20][21] Las células tumorales del subtipo GCB se asemejan a las células B normales en el centro germinal, y generalmente se asocian con una pronóstico favorable.[22][23] Los linfomas ABC se asocian con un peor pronóstico[23] y su nombre deriva de los estudios que muestran la activación continua de ciertas vías normalmente activadas cuando las células B interaccionan con un antígeno. La ruta de NF-κB, que normalmente está implicada en la transformación de las células B en células plasmáticas productoras de anticuerpos, es un importante ejemplo de esas vías de señalización.[24] Otro hallazgo notable de los estudios de expresión génica es la importancia de las células y estructuras microscópicas halladas entre las células B malignas dentro del tumor DLBCL, un área conocida comúnmente como el microambiente tumoral. La presencia de firmas de expresión de genes comúnmente asociados con los macrófagos, células T y remodelación de la matriz extracelular parece estar asociada con un mejor pronóstico y mejor supervivencia.[25] Alternativamente, la expresión de genes que codifican para factores pro-angiogénicos se correlaciona con una peor supervivencia.

Recientemente, ha sido descrita la importancia de ARN cortos no codificantes, denominados microARN (miARN), en la biología del linfoma. En células B malignas, el miARN participa en rutas de señalización fundamentales para estas células, como la señalización mediada por receptores de células B (BCR), interacciones célula-célula en los nichos inmunológicos, y la producción y cambio de clase de inmunoglobulinas.[26] Los miARN intervienen en la maduración de células B, generación de las zonas marginal y folicular, desarrollo del subtipo de células B1, células plasmáticas y células B de memoria.[26]

Con el éxito aparente de los perfiles de expresión génica en la separación de casos biológicamente distintos de DLBCL-NOS, algunos investigadores examinaron si una distinción similar podría hacerse mediante tinción inmunohistoquímica (IHC), un método ampliamente utilizado para la caracterización de las muestras de tejido. Esta técnica utiliza tinciones basadas en anticuerpos altamente específicos para detectar las proteínas en un portaobjetos de microscopio, y dado que los microarrays no están ampliamente disponibles para el uso clínico de rutina, la IHC es una alternativa atractiva.[27][28] Muchos de estos estudios se centraron en la marcación contra los productos de genes pronósticos, que habían sido implicados en la patogénesis del DLBCL en estudios de expresión génica. Ejemplos de tales genes incluyen BCL2, BCL6, MUM1, LMO2, MYC, y p21. De esta investigación surgieron varios algoritmos para separar los casos de DLBCL, y para categorizar a las muestras de tejido en grupos como GCB y no GCB.[28][29][30][31]

En esta primera etapa, para estudiar la susceptibilidad genética, se realizó un GWAS de DLBCL utilizando casos y controles de ascendencia europea de 22 estudios de linfomas no Hodking (NHL). Para determinar el subtipo de NHL, se utilizó la clasificación jerárquica propuesta por la Organización Mundial de la Salud (OMS). Se genotiparon todos los casos de DLBCL con suficiente ADN y un subconjunto de los controles, emparejados por edad y sexo, junto con 4% duplicados de control de calidad. Se seleccionaron de esta etapa 611,844 SNPs que superaron los criterios de calidad, observando valores de significación genómica, concordancia y otros valores estadísticos.

En esta etapa se incluyen los datos de tres GWAS anteriores independientes, dos de ellos no publicados hasta el momento (GELA/EPIC y Mayo) y uno ya publicado (USCF), con un total de 1,196 casos y 1,445 controles. El análisis se restringió a SNPs comunes en la base del Proyecto 1000 genomas versión 3, ya que los datos utilizados provenían de distintas plataformas. Se ajustaron los criterios de control de calidad para estos estudios, para analizar todos los casos bajo las mismas condiciones. En el meta-análisis de todos los SNPs de las etapas 1 y 2 se identificaron 19 SNPs significativos, y 134 con un nivel de significancia sugerente; 123 de los totales situados en la región HLA del cromosoma 6.

En la última etapa se realizaron estudios de replicación y validación técnica. El genotipado de novo de 8 SNPs en los loci más significativos fuera de la región HLA y uno dentro de ésta.

Como resultado de este estudio,[42] se obtuvieron cinco SNPs en cuatro loci con una relación significativa con la enfermedad, que pueden ser relacionados con los siguientes genes: EXOC2, PVT1, NCOA1 y HLA-B.

- EXOC2: Se ha asociado este gen al locus de susceptibilidad rs116446171 situado en la región 6p25.3. Este gen codifica una proteína que forma parte de un gran complejo multiproteico, responsable del tráfico de vesículas, el mantenimiento y la transferencia intercelular de proteínas virales. Esta proteína tiene una función importante en el mantenimiento de la polaridad de la célula epitelial, motilidad celular, citocinesis, proliferación y metástasis, por lo que juega un papel crucial en procesos carcinogénicos.

- PVT1: Este estudio ha asociado dos variantes para el locus 8q24.21 (rs13255292 y rs4736601). Esta región da lugar a un ARN no codificante, implicado en la activación de MYC. La proximidad de PVT1 y el oncogén MYC, que se sabe que está desregulada en algunos DLBCLs, sugiere que la variación de la línea germinal en esta región también podría contribuir al riesgo de padecer la enfermedad.

- NCOA1: Se identificó el SNP rs79480871 situado en 2p13.3 como locus de susceptibilidad, cerca del gen NCOA1. Se trata de un coactivador de esteroides y hormonas, y la proteína sintetizada está involucrada en la endocitosis mediada por clatrina. Pero no se encontró una conexión clara entre este SNP y el gen NCOA1, ya que no pertenecen al mismo haplotipo, por lo que se requiere un mayor estudio de esta región.

- HLA-B: La asociación más fuerte en la región HLA fue con HLA-B, del SNP rs2523607 y el alelo HLA-B08:01, con una valor muy alto de ligamiento. HLA-B codifica para una cadena pesada de HLA de clase I, que heterodimeriza con una cadena ligera. El HLA de clase I tiene un papel central en la presentación de antígenos propios o extraños, procesados intracelularmente, a linfocitos T citotóxicos. Las moléculas de HLA de clase I se han relacionado con multitud de enfermedades y cánceres del sistema inmune. Los resultados sugieren una posible asociación de otros loci dentro de la región HLA con esta enfermedad, pero se requiere un mayor estudio para evaluar esta posibilidad.[42]