Extraction au phénol-chloroforme

L'extraction au phénol-chloroforme est un procédé d'extraction liquide-liquide utilisé en biochimie et en biologie moléculaire pour isoler les acides nucléiques — ADN et ARN — en les séparant des protéines. Ce procédé de séparation repose sur la différence de solubilité des acides nucléiques et des protéines dans une émulsion à deux phases : une phase aqueuse et une phase organique. Il a été développé en 1987 par Piotr Chomczynski et Nicoletta Sacchi[1],[2].

L'extraction au phénol-chloroforme fait intervenir un mélange équimolaire de chloroforme CHCl3 et de phénol C6H5OH avec un chaotrope tel que le thiocyanate de guanidinium [CH6N3]+SCN− ou le chlorure de guanidinium [CH6N3]+Cl−. Les protéines ainsi dénaturées s'accumulent dans la phase organique phénol:chloroforme tandis que l'ARN est dissous dans la phase aqueuse avec les autres composés hydrophiles tels que les sels ou les oligosaccharides ; l'ADN se trouve généralement proche de l'interface entre les deux phases. Les acides nucléiques peuvent être précipités sélectivement avec de l'éthanol ou de l'isopropanol une fois les deux phases séparées par centrifugation.

Notes et références
  1. (en) Piotr Chomczynski et Nicoletta Sacchi, « Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform extraction », Analytical Biochemistry, vol. 162, no 1,‎ , p. 156-159 (PMID 2440339, DOI 10.1016/0003-2697(87)90021-2, lire en ligne)
  2. (en) Piotr Chomczynski et Nicoletta Sacchi, « The single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate–phenol–chloroform extraction: twenty-something years on », Nature Protocols, vol. 1, no 2,‎ , p. 581-585 (PMID 17406285, DOI 10.1038/nprot.2006.83, lire en ligne)
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