Milieu TCBS

Le milieu TCBS a été créé par Kobayshi en 1963 par une modification du milieu de Nakanishi[1]^,[2]. Il est aussi appelé gélose TCBS[3] ou milieu Thiosulfate Citrate Bile Saccharose[4]. C'est un milieu de culture qui permet l’isolement sélectif des vibrions entéropathogènes de par sa forte concentration en bile et en citrate associée à un pH élevé[1]^,[5]. Dans ces conditions, Vibrio cholerae et Vibrio parahaemolyticus se cultivent bien. L'espèce Vibrio cholerae qui est saccharose +, forme des colonies jaunes en 24h à 37°C[5]^,[3]. La croissance des entérocoques et des entérobactéries n’est cependant que ralentie[5]. Les colonies de Vibrio, saccharose+ et H₂S– apparaissent jaunes sans centre noir.

Le milieu TCBS est toutefois moins efficace que le milieu MSA-B pour dénombrer les Vibrio totales[2].

(Formule en g/L d'eau distillée)[1]^,[2]

- Peptone...................................... 10
- Extrait de levure............................  5
- Citrate de sodium............................ 10
- Thiosulfate de sodium........................ 10
- Chlorure de sodium........................... 10
- Bile de bœuf.................................  8
- Citrate ferrique.............................  1
- Saccharose................................... 10 à 20
- Bleu de bromothymol..........................  0,04
- Bleu de thymol...............................  0,04
- Agar......................................... 14

pH final ~ 8,6

• Base nutritive enrichie par des extraits de levure.
• Forte concentration d'inhibiteurs :
  • citrate de sodium
  • thiosulfate de sodium
  • bile de bœuf dont la fonction est d'inhiber les bactéries à gram positif[3]
• Deux critères de différenciation :
  • fermentation du saccharose (révélé par les indicateurs de pH),
  • production d'H₂S à partir du thiosulfate de sodium (révélé par le citrate ferrique).
• NaCl à concentration favorable pour les Vibrio.
• Le pH alcalin qui renforce l'effet sélectif et favorise la croissance des bactéries du genre Vibrio[3]
• Couleur finale du milieu : verte

La fermentation du saccharose se traduit par un virage au jaune de la colonie[5]^,[3].

• Colonie jaune : bactérie saccharose +
  • Les colonies deviennent jaunes grâce à l'acidification du milieu par fermentation du saccharose => saccharose +
  • c'est le cas de Vibrio cholerae, Vibrio fluvialis, Vibrio alginolyticus et Vibrio anguillarum[5]
• Colonie verte : bactérie saccharose -
  • Ces colonies restent bleues ou vertes car il n'y a pas d'acidification du milieu sans fermentation du saccharose

La production d'H₂S se décèle grâce au noircissement du centre de la colonie[3].

• Colonie à centre noir : H2S +
  • les bactéries capables de former de sulfure d’hydrogène à partir de thiosulfate de sodium ont un centre noir et sont H2S +
• Colonie sans centre noir : H2S –
  • incapables de former du sulfure d'hydrogène, ces bactéries n'auront pas de centre noir sur leurs colonies et sont H2S –

Les bactéries du genre Vibrio, contrairement aux autres bactéries, se développent facilement sur ce milieu sans jamais produire d'H₂S. Vibrio cholerae se repère grâce à ses colonies jaunes.

• Cet article est partiellement ou en totalité issu de l'article intitulé « Thiosulfate Citrate Bile Saccharose » (voir la liste des auteurs).