Comment procéder à l'étalonnage d’une pipette

Coécrit par Meredith Juncker, PhD

La pipette est un équipement de laboratoire qui sert à mesurer et à transférer un liquide. La précision de mesure d'une pipette est très importante, car la moindre différence dans le volume peut fausser les résultats expérimentaux. Il est important de procéder à l'étalonnage des pipettes tous les mois pour en assurer l'exactitude. Ce processus est utile pour vérifier si l'appareil distribue des volumes précis de liquide et si tel n'est pas le cas, vous pourrez rapidement la faire réparer.

Partie 1

Partie 1 sur 2:
Vérifier l'étalonnage

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Réunissez le matériel nécessaire. Pour garantir l'exactitude d'une pipette, il vous faudra une pipette, des embouts, de l'eau distillée, un bécher, un thermomètre, une coupelle de pesée et une balance. La balance à utiliser doit offrir des portées allant jusqu'au microgramme afin de calibrer la pipette avec une valeur maximale de 1 μL ^{[1]
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Source de recherche}.
- Le volume maximum d'eau à utiliser est de 5 mL. Versez l'eau dans le bécher.
- Les embouts à utiliser doivent être en bon état et doivent pouvoir bien s'adapter à votre pipette.
2
Mesurez la température de l'eau distillée. Insérez le thermomètre dans l'eau distillée et laissez-le pendant au moins 60 secondes. Si la substance rouge contenue dans le thermomètre se déplace toujours, attendez une minute de plus. Après une minute, notez la température. Retirez le thermomètre et séchez-le ensuite ^{[2]
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Source de recherche}.
- Il est important de connaitre la température de l'eau, car vous l'utiliserez pour effectuer les calculs nécessaires pour vérifier l'étalonnage.
3
Posez la coupelle de pesée et mettez la balance à zéro. Idéalement, votre balance doit disposer d'une portière et d'une chambre isolée. Mettez la coupelle de pesée dans la chambre et fermez-la. Si votre balance ne dispose pas de chambre ni de portière, posez simplement la coupelle dessus. Appuyez sur le bouton Zéro ou Tare et attendez que l'écran affiche zéro ^{[3]
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Source de recherche}.
- La mise à zéro de la balance annule le poids du conteneur en plastique et ne permet de peser que le contenant.
4
Préparez la pipette. Essuyez-la d'abord avec de l'éthanol et assurez-vous que son extrémité n'est pas bouchée. Placez l'embout approprié sur l'extrémité de la pipette et définissez le volume à tester ^{[4]
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Source de recherche}.
- Testez le plus petit volume ainsi que le plus grand volume de liquide pouvant être prélevé de la pipette ^{[5]
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  Source de recherche}.
5
Rincez l'embout avant de commencer. Appuyez sur le bouton jusqu'à la première butée et insérez l'embout dans l'eau distillée d'environ 2 mm de profondeur. Relâchez le bouton pour aspirer le liquide, puis distribuez à nouveau le liquide en appuyant sur le bouton. Répétez cette étape trois fois pour nettoyer complètement l'embout de la pipette avant utilisation ^{[6]
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Source de recherche}.
- Appuyez sur le bouton jusqu'à la deuxième butée pour distribuer le liquide restant dans l'embout, puis retirez la pipette de l'eau.
6
Aspirez le volume d'étalonnage. Avec l'embout que vous venez de retirer de l'eau, appuyez sur le bouton jusqu'à la première butée. Introduisez l'embout dans l'eau distillée jusqu'à une hauteur de 2 mm et relâchez le bouton pour aspirer le liquide. Attendez environ une seconde avant de le retirer ^{[7]
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Source de recherche}.
- Assurez-vous que l'embout est complètement immergé pendant toute la durée du processus d'aspiration. Il ne devrait avoir aucune bulle à l'intérieur, sinon vos résultats seront erronés.
7
Distribuez le liquide dans la coupelle de pesée. Placez l'embout contre le fond du récipient et appuyez sur le bouton jusqu'à la première butée. Ciblez un autre point légèrement éloigné du premier et appuyez sur le bouton jusqu'à la deuxième butée. En maintenant le bouton enfoncé, soulevez l'embout de la coupelle de pesée ^{[8]
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Source de recherche}.
- Conservez l'embout de la pipette, car vous l'utiliserez à nouveau pour d'autres tests d'étalonnage.
8
Notez le poids indiqué sur la balance. Fermez la portière de la balance si vous utilisez une balance disposant d'une chambre de pesée. Attendez que les chiffres s'arrêtent. Pour enregistrer le poids indiqué sur l'écran ^{[9]
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Source de recherche}.
- Il est important d'attendre que les chiffres ne défilent plus sur l'écran avant de noter le poids. Vos calculs seront erronés si vous n'attendez pas.
9
Répétez ce processus à 10 reprises au moins. Mettez la balance à zéro, rincez l'embout, aspirez le même volume, distribuez le liquide, puis enregistrez le poids. Notez le poids d'eau distillée pour le même volume, puis calculez la moyenne de tous les poids que vous avez enregistrés ^{[10]
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Source de recherche}.
- Vous pouvez répéter ce processus avec différents volumes, à condition que vous notiez plusieurs fois le poids d'eau distillée pour chaque volume.
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Partie 2

Partie 2 sur 2:
Calculer les résultats

1
Écrivez la formule pour calculer le volume distribué. La formule pour calculer le volume de liquide libéré par la pipette est V = w x Z, w étant le poids de l'eau, Z le coefficient de conversion basé sur la densité de l'eau et V le volume d'eau libéré.
- La variable Z peut être obtenue en calculant la densité de l'eau à l'aide de la température enregistrée au début de l'expérience ^{[11]
  X
  Source de recherche}.
- Par exemple, si la température de l'eau était de 23 °C, la valeur de Z est de 1,003 5 µg/mg.
2
Calculez le poids moyen de tous les essais. Supposons que vous avez pesé le volume d'eau distribué à 10 reprises. Pour calculer la moyenne de ces valeurs enregistrées, additionnez-les et divisez la somme par 10.
- Pour un volume de 10 µL d'eau, voici les résultats obtenus après les10 tests de notre exemple : 9,89 ; 10,02 ; 10,01 ; 9,99 ; 10,04 ; 9,95 ; 9,96 ; 9,99 ; 10,01 et 9,98.
- La moyenne est 9,984, soit (9,89 + 10,02 + 10,01 + 9,99 + 10,04 + 9,95 + 9,96 + 9,99 + 10,01 + 9,98) / 10 = 99,84 / 10.
3
Remplacez les variables par leur valeur dans l'équation et résolvez-la. Une fois que vous connaissez la valeur des variables, insérez-les dans l'équation et résolvez-la. Pour trouver le volume d'eau libéré, multipliez le poids moyen de tous les tests effectués par la valeur Z.
- Revenons à l'exemple précédent : V = w*Z = 9,984 x 1,003 5 = 10,019.
4
Calculez la précision de la pipette. Utilisez l'équation A = 100 x V_avg/V₀ pour calculer la précision de la pipette. A indique la précision de la pipette, V_avg est la moyenne du volume calculée et V₀ représente la valeur définie sur la pipette. Vous devriez obtenir entre 99 et 101 % de précision ^{[12]
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Source de recherche}.
- Si la pipette est bien étalonnée, la valeur calculée devrait avoisiner la valeur réelle définie sur la pipette.
- Toujours avec notre exemple, on obtient une précision à 100,19 pour cent, soit A = 100 x V_avg/V₀ = 100 x 10,019 / 10 = 100 x 1,001 9.
- Vu ce résultat de précision, nous pouvons dire que cette pipette est bien calibrée.
5
Si nécessaire, contactez un service de réparation et d'étalonnage. Si le test d'étalonnage n'est pas concluant, n'utilisez plus votre pipette pour des expériences. La pipette est un instrument de laboratoire très fragile et couteux. Si vous rencontrez un problème de calibrage qui vous dépasse, contactez une entreprise spécialisée en réparation et étalonnage de pipettes ^{[13]
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Source de recherche}.
- Vous pouvez également contacter l'entreprise qui fabrique la marque de pipette que vous utilisez pour obtenir un service de réparation.
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